HPLC法測定鎮咳寧顆粒中白花前胡甲素的含量
作者：汪保國 陳思東 周衛平 原素 林雪穎【摘要】目的 建立復方制劑鎮咳寧顆粒中白花前胡甲素的含量測定方法。方法 采用高效液相色譜法采用phenomenexluna C18色譜柱，乙腈－水梯度洗脫；檢測波長：321nm；柱溫：26℃。結果 白花前胡甲素在0.185ug～3.7ug范圍內線性關系良好，r＝1；回收率99.62％，RSD為0.37％。結論 本測定方法簡便可行、重復性好，可用于本制劑中的質量控制。
【關鍵詞】鎮咳寧顆粒 白花前胡甲素 含量測定
鎮咳寧顆粒由前胡、紫菀、枳殼等多味中藥組成，具散風清熱，化痰止咳之功。用于治療風熱咳嗽，痰多，喘滿等癥狀。前胡為方中君藥，具有散風清熱、降氣化痰等功效，其主要含有多種類型的香豆素及其糖苷[1]，文獻報道白花前胡甲素是前胡藥材的代表性成分[2－4]。本方參照藥典［5］選用白花前胡甲素作為指標成分，采用HPLC法測定白花前胡甲素的含量。
1 儀器與試藥
Aiglent 1100高效液相色譜儀(美國Aiglent公司，配有自動進樣器，柱溫箱，二級管陳列檢測器（DAD），四元（型號）泵，Aiglent-Chemstation 化學工作站。
鎮咳寧顆粒(批號：20080115、20080116、20080117)，由廣州中醫藥大學新藥開發研究中心提供；陰性對照樣品(自制) ；白花前胡甲素(供含量測定用，110753-200413)，由中國藥品生物制品檢定所提供。乙腈為色譜純，液相用水為超純水，其余試劑為分析純。
2 方法與結果
2.1 色譜條件
phenomenex luna C18(250mm×4.6mm,5um)為固定相；流動相乙腈為流動相A，水為流動相B，按下表進行梯度洗脫(表1)；流速：1mL／min；檢測波長為321nm；柱溫：26℃；進樣量：10uL。在該色譜條件下，白花前胡甲素峰可達基線分離，其它藥材成分對測定無干擾，結果見圖1。
表1 流動相梯度洗脫時間表
白花前胡甲素對照品 復方供試品 缺前胡陰性對照
圖1 HPLC 色譜圖
2.2 對照品溶液的制備
精密稱取白花前胡甲素對照品適量，加甲醇溶解定容，制成濃度為0.185mg/mL的白花前胡甲素對照品溶液。
2.3 供試品溶液的制備
取樣品適量，研細，取細粉0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中,精密加入80%乙醇50ml,稱定重量,超聲處理（250W，40kHz）30分鐘, 放冷，再稱定重量,用80%乙醇補足減失的重量,搖勻,微孔濾膜濾過, 取續濾液，作為供試品溶液。
2.4 線性關系考察
分別精密吸取對照品溶液1,2,4，8,l0,l2,16,20uL進行色譜測定，按上述色譜條件測定峰面積，以對照品進樣質量(X，ug)對峰面積(Y，mAu．Sec)進行線性回歸，求得回歸方程為：Y=1095.7X-1.4585，r=1，線性范圍0.185ug～3.7ug。（見表2）
表2 白花前胡甲素標準曲線的測定
2.5 精密度試驗
精密吸取對照品溶液10uL，連續進樣6次，測得峰面積積分值。白花前胡甲素平均峰面積為2031.53，RSD為1.28％。結果表明儀器精密度良好。
2.6 穩定性試驗
精密吸取同一供試品溶液10uL，于0，2，4，8，12 h進樣測定。白花前胡甲素平均峰面積為1052.07，RSD為2.15％。表明供試品溶液在12h內穩定。 2.7 重復性試驗
取同一批次樣品(20080115)，按供試品溶液制備項下操作，平行制備6份，按上述色譜條件測定含量，結果白花前胡甲素平均含量為0.8012mg/ g，RSD為1.57%。結果表明本方法重復性良好。
2.8 加樣回收率試驗
同一批次已知含量的鎮咳寧顆粒(20080115)適量，研細，取細粉約0.5g，精密稱定，精密加入一定量的白花前胡甲素對照品，按供試品溶液制備項下操作，重復操作6份，按上述色譜條件測定含量，計算回收率，結果見表3。結果表明該方法具有良好的回收率。
表3 加樣回收試驗結果（n＝6）
2.9 樣品測定
精密稱取鎮咳寧顆粒0.5g，按樣品制備方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀中，測定含量。共測定3批，結果見表4。
表4 鎮咳寧顆粒含量測定結果（n＝3）
3 討論
3.1 供試品溶液制備方法曾考察提取方法(超聲、回流)、提取溶劑（50％乙醇、80％乙醇、甲醇）、提取溶媒量(50倍量、100倍量、200倍量) 、提取時間(15min、30min、45 min)。加熱回流與超聲處理樣品，兩者提取的白花前胡甲素含量相差不大，從操作簡便角度考慮，確定提取方法為超聲提取；三種不同溶媒進行提取，白花前胡甲素含量無差異。80%乙醇提取液更為澄清，容易濾過，因此提取溶媒選用80%乙醇；溶媒用量為100倍量和200倍量時提取效果差異不大，均高于50倍量時的提取效果，因此選擇溶媒用量為100倍量。超聲處理30min與45min結果近似，略高于超聲處理15min，因此選擇樣品超聲處理30min。
3.2 本實驗曾采用乙腈-水、甲醇-水等系統的不同梯度作為流動相，結果采用乙腈與水溶液梯度洗脫，分離效果好，重現性強。本測定方法可用于鎮咳寧顆粒的質量控制。
參 考 文 獻
[1]南京中醫藥大學.中藥大辭典[M].上海科技出版社,2006:3278.
[2]梁曉天主編.常用中藥基礎研究(第二卷)科學出版社,2004:378-380.
[3]關福蘭,金萬寶,章新華等.白花前胡甲素對高鉀、乙酰膽堿收縮的離體家兔氣管平滑肌的作用[J].中國醫科大學學報,1994,23(6):549—552.
[4]何冬梅等.白花前胡藥理作用的研究進展[J].藥學與臨床研究,2007,15(3):167-170.
[5]中華人民共和國藥典(一部)[S].北京化學工業出版社.2005:152-153.
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